Может быть, вы хотите денатурировать белок для научного проекта, или, может быть, вы читали о денатурированной пище и хотите узнать, как это работает. Денатурация - это процесс, при котором белок теряет свою форму и структуру из-за воздействия внешних сил, включая тепло, излучение, кислоты и растворители. Органические растворители обычно денатурируют белки. Точный способ денатурирования белка зависит от того, с каким конкретным белком вы хотите работать, поскольку все они требуют разных денатурирующих агентов на разных уровнях. Однако практически любой белок можно денатурировать, если вы знаете, что нужно изменить в среде белка.
Шаги
Метод 1 из 2: денатурация белка
Шаг 1. Используйте тепло
Тепло - один из самых простых и распространенных способов денатурировать белок. Когда рассматриваемый белок присутствует в пище, простое приготовление пищи денатурирует белки. Многие белки можно денатурировать, подвергая их температуре 100 ° C (212 ° F) или выше. Это позволяет белкам коагулировать и снижать их растворимость.
Продолжительность воздействия зависит от того, что вы подвергаете воздействию тепла. Например, яйцо можно приготовить на сковороде на среднем огне за пять минут, а жаркое может занять несколько часов в духовке
Шаг 2. Нанесите спирт
Спирт разрушает водородные связи, возникающие между амидными группами пептидной связи. Когда белок подвергается воздействию спиртового раствора, молекулы спирта образуют новые связи с белковой цепью. Используйте раствор 70% спирта, чтобы пробить клеточную стенку бактерий и денатурировать белок.
Концентрированные спирты могут быть опасными, поскольку они легковоспламеняемы и токсичны. Всегда надевайте полный комплект защитного снаряжения, включая перчатки и защиту для глаз, и обращайтесь в безопасную среду с контролируемой температурой
Шаг 3. Измените pH
Внутренняя структура белка может быть разрушена, когда его среда очень кислая или очень щелочная, поскольку они разрушают ионные связи, которые удерживают солевые мостики белка вместе. Добавьте к белку кислотный или щелочной раствор. Окружающая среда должна иметь pH выше 10 или ниже 4, чтобы способствовать денатурации. Если вы вызываете изменение кислотой, pH должен быть от 2 до 5.
Изменение pH может ионизировать аминокислоту в зависимости от pKa каждой функциональной группы в этой аминокислоте. Вы также можете ионизировать аминогруппу или карбоксильную группу, присутствующую в аминокислоте
Шаг 4. Попробуйте соли тяжелых металлов
Тяжелые металлы могут разрушать связи в белке, в результате чего он теряет свою структуру. Соли тяжелых металлов, таких как ртуть и свинец, могут использоваться для денатурирования различных белков. Такие соли можно приобрести у большинства поставщиков химических веществ, и их всегда следует использовать с осторожностью и с использованием надлежащего защитного снаряжения, включая перчатки и защиту для глаз.
Тяжелые металлы могут взаимодействовать с функциональными группами боковой цепи белка с образованием комплексов. Тяжелые металлы также окисляют боковые цепи аминокислот белка
Метод 2 из 2: Ренатурирующие белки
Шаг 1. Определите, может ли белок складываться заново
Некоторые формы денатурации являются постоянными, а другие можно отменить. Например, приготовление яйца или мяса невозможно отменить, но белок, подвергшийся воздействию высокого pH, может восстановить форму при помещении в более нейтральную среду.
Сможет ли белок свернуться или нет, будет зависеть от его ДНК. ДНК будет содержать информацию, необходимую для того, чтобы белок вернулся в свое естественное состояние
Шаг 2. Удалите денатурирующий фактор
Верните среду вокруг белка в состояние застоя и удалите денатурирующий элемент. Например, удалите кислоту или основание или верните белок до более приемлемой температуры.
Шаг 3. Используйте набор для ренатурации
Многие компании, производящие лабораторные принадлежности, продают наборы для ренатурации, которые позволяют определить лучшие параметры, способствующие ренатурации. Такие наборы могут быть особенно полезны, если вы изучаете белки в лабораторных или экспериментальных условиях.
подсказки
- Денатурированный белок теряет свою четвертичную, третичную и вторичную структуру, которая проявляется в его нативном состоянии, но его первичная структура остается.
- Денатурированный белок также теряет часть своей биологической активности, в некоторых случаях, как в случае с ферментами, теряя свою способность функционировать. Например, субстраты могут больше не связываться с ферментами, которые были денатурированы.
- Денатурированный белок может потерять растворимость в растворе.
- Вы также можете денатурировать нуклеиновые кислоты, используя лабораторные методы для разделения цепей.
